Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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WDR77 Double Nickase Plasmid (h): sc-403890-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das WDR77 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- WDR77 Double-Nickase-Plasmid (h) und WDR77 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf WDR77 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: WDR77: sc-376549
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
WDR77 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403890-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
WDR77 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403890-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
WDR77 (auch als MEP50 bekannt) kodiert ein WD-Repeat-Gerüstprotein, das als obligater Kofaktor von PRMT5 dient und die symmetrische Dimethylierung von Argininresten an Histonen sowie an verschiedenen RNA-bindenden Proteinen unterstützt. Über diesen PRMT5–WDR77-Methylosom-Komplex beeinflusst WDR77 die Chromatinorganisation, die Transkriptionskontrolle und das pre-mRNA-Spleißen, mit nachgelagerten Effekten auf den Zellzyklus und Linien-/Differenzierungsprogramme. WDR77 wurde zudem mit der Ko-Regulation des Androgenrezeptors und einer breiteren nukleären Rezeptor-Signalgebung in Verbindung gebracht, wodurch es an Signalwege gekoppelt ist, die Proliferations- und Differenzierungszustände prägen. Eine dysregulierte PRMT5/WDR77-Aktivität wird häufig in der Krebsbiologie und in Entwicklungszusammenhängen untersucht, in denen Defekte der Epigenetik und der RNA-Prozessierung zu veränderten Genexpressionsnetzwerken beitragen.
WDR77 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des WDR77-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von WDR77 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die WDR77-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit WDR77-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.