Plasmide CRISPR d'Activation (h) WDR77: sc-403890-ACT

WDR77 (également connu sous le nom de MEP50) code une protéine échafaudage à répétitions WD qui agit comme cofacteur essentiel de PRMT5, en coordonnant la diméthylation symétrique de résidus d’arginine sur les histones et sur diverses protéines liant l’ARN. Via ce complexe PRMT5–WDR77, WDR77 contribue au remodelage de la chromatine, à la régulation transcriptionnelle et à des programmes d’épissage de l’ARN qui gouvernent la progression du cycle cellulaire et l’expression de gènes spécifiques de lignée. Les réseaux de méthylation associés à WDR77 interfèrent avec des voies contrôlant les réponses aux dommages de l’ADN et la transcription dépendante de signaux, reliant la régulation épigénétique aux états de prolifération cellulaire. Une dérégulation de l’activité PRMT5/WDR77 et des signatures de méthylation en aval a été rapportée dans de multiples contextes cancéreux et développementaux, ce qui motive des études mécanistiques sur le contrôle génique dépendant de WDR77.

WDR77 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de WDR77 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

WDR77 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus WDR77 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription WDR77, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de WDR77. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus WDR77 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de WDR77 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie WDR77 dans les cellules tumorales présentant une expression de WDR77 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.