Plasmide CRISPR/Cas9 KO WDR59 (h): sc-405648

Présentation

WDR59 (WD repeat domain 59) est une protéine d’échafaudage à répétitions WD40 qui constitue un composant central du complexe GATOR2, un régulateur amont majeur de la signalisation mTORC1. Via GATOR2, WDR59 contribue aux voies de détection des acides aminés qui contrôlent l’activation lysosomale de mTORC1, influençant ainsi la synthèse protéique, les programmes de croissance dépendants des nutriments et l’autophagie. Une perturbation de la signalisation dépendante de WDR59 peut remodeler le métabolisme cellulaire et les réponses au stress, des processus fréquemment étudiés en biologie du cancer et dans d’autres troubles liés à une activité mTOR dérégulée. Par conséquent, WDR59 est couramment étudiée pour son rôle dans l’intégration de la disponibilité en nutriments avec la croissance cellulaire et l’homéostasie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO WDR59 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène WDR59 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du WDR59, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert WDR59 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine WDR59.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en WDR59 pour l'étude de la signalisation de WDR59, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de WDR59 essentiels à la fonction de WDR59
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de WDR59 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le WDR59 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le WDR59 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus WDR59. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le WDR59 plasmide HDR (h) et le WDR59 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie WDR59 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles WDR59 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.