WDR5 Lentiviral Activation Particles (m2): sc-431247-LAC-2

Das Mausgen Wdr5 kodiert WDR5, ein konserviertes WD40-Repeat-Gerüstprotein, das einen Kernbestandteil der Histon-H3K4-Methyltransferase-Komplexe der SET/MLL-Familie bildet und chromatinassoziierte Assemblierungsfaktoren koordiniert, um transkriptionelle Programme zu regulieren. WDR5 unterstützt die epigenetische Kontrolle der Genexpression durch die Regulation von Promotoren und Enhancern, beeinflusst den Verlauf des Zellzyklus, die Linienfestlegung und die Entwicklungspatterning-Prozesse und ist mit umfassenderen Netzwerken des Chromatin-Remodelings und der RNA-Verarbeitung verknüpft. Fehlregulierte, WDR5-abhängige Chromatinzustände stehen mit veränderter Differenzierung und proliferativen Phänotypen in Zusammenhang, wie sie bei Krebs und anderen epigenetisch getriebenen Erkrankungen beobachtet werden, was Wdr5 zu einem wertvollen Ziel für mechanistische Studien der Transkriptionsregulation macht. Das Gene Editing von Wdr5 in Mausmodellen ermöglicht die funktionelle Analyse von H3K4-Methylierungswegen, die Kartierung von Protein-Protein-Interaktionen innerhalb von COMPASS/MLL-Komplexen sowie die Untersuchung kontextspezifischer Effekte auf die Stammzellbiologie und die Gewebehomöostase.

WDR5 Lentivirale Aktivierungspartikel (m2) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Wdr5-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

WDR5 Lentivirale Aktivierungspartikel (m2) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Wdr5-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen WDR5-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Wdr5-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.