Plasmide CRISPR d'Activation (m2) WDR5: sc-431247-ACT-2

Le gène murin Wdr5 code la protéine 5 contenant des répétitions WD (WDR5), un échafaudage conservé associé à la chromatine qui se lie aux queues de l’histone H3 et organise les complexes SET1/MLL afin de favoriser la méthylation de H3K4 et l’activation transcriptionnelle. WDR5 coordonne la régulation épigénétique de programmes d’expression génique contrôlant le développement embryonnaire, la spécification du destin cellulaire et la prolifération, en modulant l’état des promoteurs et des enhancers. La dérégulation du remodelage de la chromatine dépendant de WDR5 et de la méthylation de H3K4 a été associée à des réseaux transcriptionnels aberrants impliqués dans la transformation oncogénique et des troubles du développement, ce qui en fait une cible utile pour disséquer les mécanismes de maladie gouvernés par l’épigénome. L’édition du gène Wdr5 dans des modèles murins soutient des études sur l’assemblage des complexes de chromatine, les circuits transcriptionnels et la génomique fonctionnelle dans des systèmes cellulaires pertinents pour la différenciation et les maladies.

WDR5 Le plasmide d'activation CRISPR (m2) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Wdr5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

WDR5 Le plasmide d'activation CRISPR (m2) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Wdr5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Wdr5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de WDR5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Wdr5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de WDR5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie WDR5 dans les cellules tumorales présentant une expression de Wdr5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.