Plasmide CRISPR/Cas9 KO WDR17 (h): sc-414101

Présentation

WDR17 (WD repeat domain 17) code une protéine prédite contenant des répétitions WD40, supposée agir comme une protéine d’échafaudage facilitant l’assemblage de complexes multiprotéiques et soutenant des interactions protéine–protéine régulées dans le cytoplasme et au niveau de sites associés à la membrane. Bien que ses partenaires moléculaires restent imparfaitement définis, les protéines à répétitions WD influencent souvent le trafic intracellulaire, l’organisation du cytosquelette et l’intégration des signaux en coordonnant l’ubiquitination et d’autres mécanismes de contrôle post‑traductionnels. L’expression et les variations génétiques de WDR17 ont été étudiées dans le contexte de phénotypes sensoriels et neurodéveloppementaux, ce qui concorde avec le rôle des échafaudages à répétitions WD dans l’architecture cellulaire spécialisée et les voies d’homéostasie. Ces caractéristiques font de WDR17 une cible utile pour analyser l’organisation des voies dans des cellules humaines où des protéines d’échafaudage modulent la localisation et la stabilité des composants de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO WDR17 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène WDR17 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du WDR17, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert WDR17 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine WDR17.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en WDR17 pour l'étude de la signalisation de WDR17, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de WDR17 essentiels à la fonction de WDR17
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de WDR17 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le WDR17 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le WDR17 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus WDR17. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le WDR17 plasmide HDR (h) et le WDR17 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie WDR17 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles WDR17 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.