Plasmide CRISPR/Cas9 KO VWA5B2 (h): sc-406578

Présentation

VWA5B2 code une protéine contenant un domaine de type von Willebrand factor A (VWA), un motif modulaire souvent impliqué dans des interactions protéine–protéine qui soutiennent l’organisation de la matrice extracellulaire, la signalisation liée à l’adhérence et l’architecture tissulaire. Bien que VWA5B2 soit moins largement caractérisé que de nombreuses protéines à domaine VWA, sa composition prédite en domaines suggère des rôles dans l’ancrage ou l’échafaudage de complexes influençant l’attachement cellulaire, la motilité et la mécanotransduction. Une régulation altérée de l’adhérence et des processus associés à la matrice est fréquemment liée à une dérégulation du contrôle de la croissance et à des phénotypes invasifs, ce qui fait de VWA5B2 une cible utile pour étudier les voies qui couplent les interactions cellule–matrice à l’expression génique et à la dynamique du cytosquelette. Une perturbation génétique de VWA5B2 peut donc aider à définir sa contribution aux réponses au stress dépendantes du contexte et au remodelage des réseaux observés dans des états cellulaires pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO VWA5B2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène VWA5B2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du VWA5B2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert VWA5B2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine VWA5B2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en VWA5B2 pour l'étude de la signalisation de VWA5B2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de VWA5B2 essentiels à la fonction de VWA5B2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de VWA5B2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le VWA5B2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le VWA5B2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus VWA5B2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le VWA5B2 plasmide HDR (h) et le VWA5B2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie VWA5B2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles VWA5B2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.