Plasmide CRISPR d'Activation (h) VSTM2L: sc-414330-ACT

VSTM2L (« V-set and transmembrane domain containing 2 like ») code une protéine associée à la membrane, dotée d’un domaine de type immunoglobuline V-set, enrichie dans les tissus nerveux et impliquée dans la communication cellule–cellule et la signalisation extracellulaire. Les profils d’expression rapportés ainsi que des études fonctionnelles relient VSTM2L à la différenciation neuronale et aux processus synaptiques, suggérant un rôle dans la régulation des programmes neurodéveloppementaux et de l’activité des réseaux neuronaux. En tant que facteur associé à la surface cellulaire/au compartiment sécrété, VSTM2L est fréquemment étudié dans des voies régissant la signalisation intercellulaire, la régulation transcriptionnelle en aval d’indices médiés par des récepteurs, et l’expression génique spécifique des tissus. Une expression dysrégulée de VSTM2L a été explorée comme caractéristique moléculaire dans des contextes de recherche neurologique et neuropsychiatrique, ainsi que dans des études plus larges de signatures transcriptionnelles liées au cerveau.

VSTM2L Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de VSTM2L sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

VSTM2L Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus VSTM2L dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription VSTM2L, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de VSTM2L. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus VSTM2L natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de VSTM2L au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie VSTM2L dans les cellules tumorales présentant une expression de VSTM2L silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.