VSTM2L CRISPR Activation Plasmid (h): sc-414330-ACT

VSTM2L (V-set and transmembrane domain containing 2 like) kodiert ein membranassoziiertes Protein mit einer V-set-Immunglobulin-ähnlichen Domäne, das in neuronalen Geweben angereichert ist und mit Zell-Zell-Kommunikation sowie extrazellulärer Signalübertragung in Verbindung gebracht wird. Berichtete Expressionsmuster und funktionelle Studien verknüpfen VSTM2L mit neuronaler Differenzierung und synaptischen Prozessen, was auf Rollen bei der Regulation neuroentwicklungsbezogener Programme und der Aktivität neuronaler Netzwerke hindeutet. Als oberflächen- bzw. sekretionsassoziierter Faktor wird VSTM2L häufig in Signalwegen untersucht, die die interzelluläre Kommunikation, die transkriptionelle Regulation nach rezeptorvermittelten Signalen und gewebespezifische Genexpression steuern. Eine dysregulierte VSTM2L-Expression wurde als molekulares Merkmal in neurologischen und neuropsychiatrischen Forschungskontexten sowie in breiter angelegten Studien zu hirnbezogenen Transkriptionssignaturen untersucht.

VSTM2L Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen VSTM2L-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

VSTM2L Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des VSTM2L-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der VSTM2L-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen VSTM2L-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native VSTM2L-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von VSTM2L-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des VSTM2L-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem VSTM2L-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.