Plasmide CRISPR/Cas9 KO VRL-1 (m): sc-423688

Présentation

Trpv2 code pour le canal murin VRL-1 (TRPV2), un canal cationique non sélectif de la famille des récepteurs transitoires potentiels vanilloïdes, qui contribue à l’influx de Ca²⁺ déclenché par des stimuli. VRL-1 participe à des processus cellulaires incluant la mécanoperception ainsi que les réponses au stress osmotique ou thermique, et peut moduler en aval des voies de signalisation dépendantes du calcium, influençant l’excitabilité membranaire, la dynamique du cytosquelette et les programmes transcriptionnels. Dans les lignages immunitaires et myéloïdes, l’activité de TRPV2 a été associée à la phagocytose et à la signalisation inflammatoire, tandis que, dans les tissus excitables, elle est étudiée dans le contexte de la transduction sensorielle. Des altérations de la fonction ou de l’expression de TRPV2 ont été examinées dans des modèles de douleur neuropathique, de troubles inflammatoires, de cardiomyopathie et de migration cellulaire liée au cancer, ce qui étaye sa pertinence en tant que cible mécanistique au sein de voies diverses.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO VRL-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Trpv2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Trpv2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Trpv2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine VRL-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Trpv2 pour l'étude de la signalisation de VRL-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Trpv2 essentiels à la fonction de VRL-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Trpv2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le VRL-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le VRL-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Trpv2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le VRL-1 plasmide HDR (m) et le VRL-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Trpv2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Trpv2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.