Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO VPS39 (h): sc-404507
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- VPS39 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique VPS39, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: VPS39 Antibody (C-5): sc-514762
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO VPS39 (h) | sc-404507 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
VPS39 code une sous-unité centrale du complexe d’arrimage HOPS, qui médie la fusion entre endosome tardif et lysosome ainsi qu’entre autophagosome et lysosome, soutenant la maturation endolysosomale et la dégradation des cargaisons. En coordonnant l’arrimage membranaire dépendant des GTPases Rab et la fusion pilotée par les protéines SNARE, VPS39 contribue à l’homéostasie lysosomale, au renouvellement des récepteurs et au flux de la macroautophagie. La perturbation des composants de HOPS dérègle le trafic vésiculaire et peut entraîner l’accumulation de matériel non dégradé, une signalisation endosomale altérée et des réponses au stress associées à des phénotypes de type neurodégénératif et de surcharge lysosomale. VPS39 est donc pertinent pour la recherche sur l’autophagie, la dynamique endolysosomale et les défauts de trafic intracellulaire liés aux maladies.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO VPS39 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène VPS39 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du VPS39, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert VPS39 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine VPS39.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en VPS39 pour l'étude de la signalisation de VPS39, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de VPS39 essentiels à la fonction de VPS39
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de VPS39 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le VPS39 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le VPS39 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus VPS39. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le VPS39 plasmide HDR (h) et le VPS39 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie VPS39 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles VPS39 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.