Plasmide CRISPR/Cas9 KO VPS33B (m): sc-433270

Présentation

Vps33b code pour VPS33B, une protéine de la famille Sec1/Munc18 qui agit comme un composant central des machineries d’attachement et de fusion régulant le trafic endosomal‑lysosomal. VPS33B coopère avec le réseau VPS16/18/33/41 (apparenté à HOPS/CORVET) ainsi qu’avec le complexe VPS33B–VIPAR afin de soutenir l’amarrage des vésicules, la fusion membranaire et le maintien de la polarité épithéliale. Dans les cellules murines, l’activité de VPS33B contribue au tri du cargo, à la biogenèse d’organites apparentés aux lysosomes et à la sécrétion régulée, ce qui la relie à des voies plus larges contrôlant l’homéostasie membranaire et le transport intracellulaire. La perturbation du trafic dépendant de VPS33B a été associée à des défauts de transport polarisé et de formation des granules plaquettaires, fournissant un cadre mécanistique pour l’étude de pathologies impliquant des dysfonctionnements épithéliaux et hématopoïétiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO VPS33B (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Vps33b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Vps33b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Vps33b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine VPS33B.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Vps33b pour l'étude de la signalisation de VPS33B, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Vps33b essentiels à la fonction de VPS33B
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Vps33b pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le VPS33B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le VPS33B plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Vps33b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le VPS33B plasmide HDR (m) et le VPS33B (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Vps33b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Vps33b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.