VPS33B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406200

Visão geral

VPS33B codifica um componente central da maquinaria de ancoragem (tethering) da classe C/VPS, que coordena a ancoragem de vesículas e a fusão dependente de SNARE no sistema endolisossomal. Atua em conjunto com VPS16 e parceiros relacionados para regular a maturação de endossomos, a biogénese de lisossomas e o tráfego polarizado de membranas, influenciando assim a triagem, a reciclagem e o fluxo degradativo de proteínas. A disrupção de VPS33B perturba a polaridade epitelial e a organização da via secretória e tem sido associada a perturbações multissistémicas do tráfego intracelular, incluindo a síndrome ARC, o que a torna relevante para estudos de dinâmica de membranas e homeostase de organelos. Em tecidos imunitários e de barreira, alterações na atividade de VPS33B podem afetar o manuseamento de grânulos/vesículas e a composição de proteínas de membrana, ligando-o a questões mais amplas sobre inflamação e integridade tecidular.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO VPS33B (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene VPS33B em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do VPS33B, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do VPS33B na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína VPS33B.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de VPS33B para a investigação da sinalização de VPS33B, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) VPS33B críticos para a função VPS33B
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos VPS33B para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo VPS33B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo VPS33B Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus VPS33B. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo VPS33B Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR VPS33B (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia VPS33B para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo VPS33B definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.