Plasmide CRISPR/Cas9 KO VPAC1 (m): sc-423678

Présentation

Vipr1 code pour VPAC1, un récepteur couplé aux protéines G de classe B qui se lie au peptide intestinal vasoactif (VIP) et au polypeptide activant l’adénylate cyclase hypophysaire, s’accouple principalement à Gs et augmente l’AMPc intracellulaire. La signalisation via VPAC1 active des programmes transcriptionnels dépendants de PKA/CREB et peut interagir avec les voies MAPK et PI3K pour réguler la prolifération et la différenciation cellulaires, la fonction de barrière épithéliale et les réponses cytokiniques. Dans les tissus de souris, VPAC1 contribue à des circuits neuroendocriniens et immunorégulateurs, notamment en modulant la signalisation inflammatoire ainsi que l’activité du muscle lisse et les fonctions sécrétoires. Une dérégulation de l’axe VIP–VPAC1 a été impliquée dans des modèles de maladie inflammatoire de l’intestin, d’inflammation des voies aériennes de type asthmatique et de signalisation au sein du microenvironnement tumoral, ce qui soutient des études mécanistiques des processus immunitaires et épithéliaux pilotés par les GPCR.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO VPAC1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Vipr1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Vipr1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Vipr1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine VPAC1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Vipr1 pour l'étude de la signalisation de VPAC1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Vipr1 essentiels à la fonction de VPAC1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Vipr1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le VPAC1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le VPAC1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Vipr1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le VPAC1 plasmide HDR (m) et le VPAC1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Vipr1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Vipr1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.