VPAC1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423678

Descripción general

Vipr1 codifica VPAC1, un receptor acoplado a proteína G (GPCR) de clase B que se une al péptido intestinal vasoactivo (VIP) y al polipéptido activador de la adenilato ciclasa hipofisaria, para acoplarse predominantemente a Gs y elevar el AMPc intracelular. La señalización de VPAC1 activa programas transcripcionales dependientes de PKA/CREB y puede intersectar con las vías MAPK y PI3K para regular la proliferación y diferenciación celulares, la función de barrera epitelial y las respuestas de citocinas. En tejidos murinos, VPAC1 contribuye a circuitos neuroendocrinos e inmunorreguladores, incluida la modulación de la señalización inflamatoria y de la actividad del músculo liso y secretora. La desregulación del eje VIP–VPAC1 se ha implicado en modelos de enfermedad inflamatoria intestinal, inflamación de las vías aéreas tipo asma y señalización del microambiente asociado a tumores, lo que respalda estudios mecanísticos de procesos inmunitarios y epiteliales impulsados por GPCR.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO VPAC1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Vipr1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Vipr1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Vipr1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína VPAC1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Vipr1 para la investigación de la señalización de VPAC1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Vipr1 críticos para la función de VPAC1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Vipr1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido VPAC1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido VPAC1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Vipr1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR VPAC1 (m) y el plásmido HDR VPAC1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Vipr1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Vipr1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.