Particules Lentivirales d'Activation (h) von Willebrand Factor/VWF: sc-400217-LAC

VWF code le facteur von Willebrand, une grande glycoprotéine multimérique produite principalement par les cellules endothéliales et les mégacaryocytes, qui médie l’adhésion des plaquettes au collagène sous-endothélial exposé et stabilise le facteur VIII de la coagulation circulant. Il est stocké dans les corps de Weibel-Palade et les granules α des plaquettes, puis libéré en réponse à une lésion vasculaire, intégrant le trafic sécrétoire endothélial, la mécanotransduction dépendante du cisaillement et l’hémostase primaire. L’assemblage des multimères de VWF et leur maturation protéolytique par ADAMTS13 régulent la formation du thrombus et la perméabilité microvasculaire sous des conditions de fort cisaillement. Une modification de l’abondance de VWF ou de la distribution de ses multimères est associée à la maladie de von Willebrand et à d’autres phénotypes hémorragiques ou thrombotiques, ce qui en fait un nœud clé pour l’étude de la biologie vasculaire et des voies de la coagulation.

Les particules d'activation lentivirales von Willebrand Factor/VWF (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de VWF dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales von Willebrand Factor/VWF (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription VWF, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de von Willebrand Factor/VWF. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif VWF ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.