Plasmide CRISPR d'Activation (h) von Willebrand Factor/VWF: sc-400217-ACT

VWF code le facteur von Willebrand, une grande glycoprotéine multimérique produite par les cellules endothéliales et les mégacaryocytes, essentielle à l’hémostase primaire. Le VWF médie l’adhésion des plaquettes au collagène sous-endothélial exposé en conditions de fort cisaillement et stabilise le facteur VIII de la coagulation, reliant ainsi l’accrochage plaquettaire à la cascade de coagulation intrinsèque. La protéine est stockée dans les corps de Weibel‑Palade et les granules α plaquettaires, et sa régulation dépend du traitement des multimères et de leur clivage, ce qui influence la thrombose et l’intégrité vasculaire. Une dérégulation ou des variations génétiques de VWF sont associées à des phénotypes hémorragiques et thrombotiques, et ce gène est largement étudié en biologie endothéliale, en fonction plaquettaire et dans la recherche sur les voies de coagulation.

von Willebrand Factor/VWF Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de VWF sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

von Willebrand Factor/VWF Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus VWF dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription VWF, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de von Willebrand Factor/VWF. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus VWF natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de von Willebrand Factor/VWF au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie von Willebrand Factor/VWF dans les cellules tumorales présentant une expression de VWF silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.