Particules Lentivirales d'Activation (h) VMAT 2: sc-401308-LAC

SLC18A2 code le transporteur vésiculaire des monoamines 2 (VMAT2), une protéine intégrale de la membrane des vésicules synaptiques qui utilise le gradient électrochimique de protons pour charger la dopamine, la sérotonine, la noradrénaline, l’adrénaline et l’histamine dans les vésicules de sécrétion. En régulant la séquestration vésiculaire et la libération quantique, VMAT2 contrôle la neurotransmission monoaminergique et protège les cellules de l’oxydation des monoamines dans le cytosol, ce qui le relie aux voies du trafic vésiculaire, du métabolisme des neurotransmetteurs et du stress oxydatif. Une expression ou une fonction altérée de SLC18A2 a été associée à la vulnérabilité des neurones dopaminergiques et à des phénotypes neuropsychiatriques, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des mécanismes de la maladie de Parkinson, de la régulation de l’humeur et de la biologie des troubles liés à l’usage de substances. Le VMAT2 humain est également utilisé comme marqueur et nœud fonctionnel dans des modèles de différenciation catécholaminergique et sérotoninergique ainsi que de dynamique des vésicules synaptiques.

Les particules d'activation lentivirales VMAT 2 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de SLC18A2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales VMAT 2 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription SLC18A2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de VMAT 2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif SLC18A2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.