Plasmide Double Nickase (h) Vitamin D Receptor/VDR: sc-400171-NIC

VDR code le récepteur de la vitamine D, un récepteur nucléaire activé par un ligand qui hétérodimérise avec RXR et se lie aux éléments de réponse à la vitamine D afin de réguler des programmes transcriptionnels contrôlant l’homéostasie calcium/phosphate, la différenciation épithéliale et la modulation immunitaire. Après liaison du 1,25-dihydroxyvitamine D3, VDR coordonne l’échange de coactivateurs et de corépresseurs et s’intègre au remodelage de la chromatine pour ajuster l’expression génique au sein de voies métaboliques et inflammatoires. La signalisation VDR s’entrecroise avec les réseaux MAPK, NF-κB et Wnt/β-caténine, reliant des signaux environnementaux et hormonaux au contrôle du cycle cellulaire et aux réponses au stress. Une expression ou une fonction altérée de VDR a été associée à des troubles osseux et du métabolisme minéral, à des phénotypes auto-immuns et à la biologie tumorale, ce qui motive des études mécanistiques dans des modèles cellulaires humains pertinents.

Vitamin D Receptor/VDR Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus VDR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de VDR. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de VDR. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de VDR.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.