Plasmide CRISPR/Cas9 KO VIP (m): sc-423677

Présentation

Vip code le peptide intestinal vasoactif (VIP), un neuropeptide qui transmet ses signaux principalement via les RCPG VIPR1 et VIPR2 afin de stimuler l’adénylate cyclase, d’augmenter l’AMPc et d’activer des programmes transcriptionnels dépendants de PKA/CREB. Chez la souris, le VIP contribue à la communication neuroendocrinienne, à la coordination des rythmes circadiens au sein du noyau suprachiasmatique et à la régulation du tonus des muscles lisses, de la vasodilatation et de l’activité sécrétoire dans les tissus périphériques. La signalisation médiée par le VIP module la polarisation des cellules immunitaires et la production de cytokines, reliant cette voie à l’homéostasie inflammatoire et à la fonction de barrière des muqueuses. Une dérégulation de la signalisation VIP/VIPR a été associée à des réponses neuro-inflammatoires altérées, à des phénotypes de motilité et de sécrétion gastro-intestinales, ainsi qu’à des effets dépendants du contexte sur l’immunité associée aux tumeurs et sur des caractéristiques neuroendocrines dans des modèles de maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO VIP (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Vip dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Vip, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Vip à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine VIP.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Vip pour l'étude de la signalisation de VIP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Vip essentiels à la fonction de VIP
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Vip pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le VIP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le VIP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Vip. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le VIP plasmide HDR (m) et le VIP (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Vip pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Vip définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.