Plasmide CRISPR/Cas9 KO VILL (m): sc-423675

Présentation

Vill code la villine‑like (VILL), une protéine du cytosquelette se liant à l’actine, enrichie dans les contextes épithéliaux où elle contribue à l’organisation et au remodelage des réseaux d’actine F. Les protéines de la superfamille villine/gelsoline régulent le sectionnement, le faisceautage et la stabilisation des filaments d’actine, reliant les signaux calciques et phosphoinositidiques à des modifications de la forme cellulaire, de la polarité et de l’architecture associée à la barrière. Par ces fonctions, VILL est impliquée dans des voies contrôlant la différenciation épithéliale, l’organisation des microvillosités et le remodelage dynamique des jonctions, qui influencent l’homéostasie tissulaire. Une dynamique de l’actine dérégulée et une altération de l’intégrité structurelle de l’épithélium sont largement impliquées dans l’inflammation, la dysfonction de barrière et le remodelage associé aux tumeurs, ce qui fait de Vill un locus utile pour des études mécanistiques du contrôle du cytosquelette.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO VILL (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Vill dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Vill, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Vill à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine VILL.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Vill pour l'étude de la signalisation de VILL, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Vill essentiels à la fonction de VILL
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Vill pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le VILL plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le VILL plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Vill. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le VILL plasmide HDR (m) et le VILL (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Vill pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Vill définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.