Plasmide CRISPR/Cas9 KO VEZF1 (m): sc-423670

Présentation

Vezf1 code pour VEZF1, un facteur de transcription à doigts de zinc enrichi dans les contextes endothélial vasculaire et hématopoïétique, qui régule des programmes d’expression génique nécessaires à l’angiogenèse embryonnaire et à la mise en place du réseau vasculaire. VEZF1 intervient dans le contrôle de la différenciation endothéliale, du bourgeonnement vasculaire et du maintien de l’intégrité vasculaire en coordonnant des réseaux transcriptionnels liés à la migration cellulaire, au remodelage de la matrice extracellulaire et aux voies de signalisation du développement. Une activité altérée de Vezf1 a été associée à des défauts de formation des vaisseaux sanguins et à une létalité développementale dans des modèles murins, et ses rôles régulateurs en font une cible pertinente pour l’étude des malformations vasculaires et d’une vascularisation tissulaire insuffisante. En tant que protéine nucléaire se liant à l’ADN, VEZF1 constitue également un point d’entrée exploitable pour disséquer le contrôle transcriptionnel de la spécification de la lignée endothéliale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO VEZF1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Vezf1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Vezf1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Vezf1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine VEZF1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Vezf1 pour l'étude de la signalisation de VEZF1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Vezf1 essentiels à la fonction de VEZF1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Vezf1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le VEZF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le VEZF1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Vezf1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le VEZF1 plasmide HDR (m) et le VEZF1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Vezf1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Vezf1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.