vezatin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-418454

Übersicht

VEZT kodiert Vezatin, ein transmembranäres Zellkontaktprotein, das mit dem Cadherin‑Catenin‑Komplex assoziiert ist und Adhärenzverbindungen mit dem Aktin-Zytoskelett verknüpft. Vezatin trägt zur epithelialen Zell‑Zell-Adhäsion, zur Organisation von Zellkontakten und zu Mechanotransduktionsprozessen bei, die Gewebearchitektur und Polarität beeinflussen. Über seine Funktion an Adhärenzverbindungen ist VEZT in Signalwege eingebunden, die die Zytoskelettdynamik und kontaktabhängige Signalübertragung steuern. Eine veränderte VEZT-Expression oder ein Umbau der Zellkontakte wurde im Zusammenhang mit epithelialen Funktionsstörungen sowie krebsassoziierten Veränderungen von Adhäsion und Invasivität untersucht.

Das vezatin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des VEZT-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des VEZT-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von VEZT nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die vezatin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von VEZT-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der vezatin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf VEZT-Exone abzielen, die für die vezatin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere VEZT-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom vezatin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom vezatin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des VEZT-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das vezatin HDR-Plasmid (h) und vezatin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von VEZT-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten VEZT-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.