Plasmide CRISPR/Cas9 KO Veli3 (m): sc-423669

Présentation

Lin7c code Veli3, un membre de la famille LIN7 de protéines d’échafaudage contenant un domaine PDZ, qui organisent des microdomaines membranaires et relient des récepteurs transmembranaires à des complexes de signalisation cytosoliques. Dans les cellules de souris, Veli3 contribue à l’assemblage de réseaux de protéines de polarité et de jonctions, influençant le trafic basolatéral, la localisation des récepteurs et l’organisation du cytosquelette. Grâce à des interactions avec des MAGUK et des régulateurs de la polarité, les complexes associés à LIN7C peuvent moduler des voies qui gouvernent l’intégrité épithéliale, la connectivité neuronale et le transport médié par les vésicules. La dérégulation de la polarité cellulaire et des échafaudages jonctionnels est liée à une architecture tissulaire anormale et à une transduction du signal altérée, faisant de Lin7c une cible pertinente pour étudier des mécanismes en lien avec des défauts du développement et le remodelage pathologique de l’organisation cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Veli3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Lin7c dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Lin7c, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Lin7c à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Veli3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Lin7c pour l'étude de la signalisation de Veli3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Lin7c essentiels à la fonction de Veli3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Lin7c pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Veli3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Veli3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Lin7c. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Veli3 plasmide HDR (m) et le Veli3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Lin7c pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Lin7c définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.