Plasmide CRISPR/Cas9 KO Veli2 (m): sc-423668

Présentation

Lin7b code Veli2, une protéine d’échafaudage associée à la membrane de la famille MAGUK/LIN7, qui contribue à organiser les complexes de polarité basolatérale et à stabiliser le trafic des protéines membranaires. Veli2 participe à l’assemblage de réseaux protéiques jonctionnels et synaptiques via des interactions avec des partenaires contenant des domaines PDZ, influençant la polarité épithéliale, la signalisation neuronale et le transport vésiculaire. Dans les modèles murins, la perturbation de complexes associés à LIN7 peut altérer l’adhérence cellule–cellule, la localisation des récepteurs et l’organisation des synapses excitatrices, des processus fréquemment étudiés dans des modèles de neurodéveloppement et de fonction de barrière. Les altérations des voies de polarité et de trafic sont largement pertinentes pour comprendre les mécanismes à l’origine de phénotypes développementaux et de la dérégulation, associée aux maladies, de l’architecture tissulaire et de la connectivité neuronale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Veli2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Lin7b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Lin7b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Lin7b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Veli2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Lin7b pour l'étude de la signalisation de Veli2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Lin7b essentiels à la fonction de Veli2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Lin7b pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Veli2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Veli2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Lin7b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Veli2 plasmide HDR (m) et le Veli2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Lin7b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Lin7b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.