VEGF CRISPR Activation Plasmid (r): sc-437276-ACT

Der vaskuläre endotheliale Wachstumsfaktor (VEGF) ist ein zentraler Regulator der Angiogenese und der Gefäßpermeabilität in Rattengeweben und koordiniert während der Entwicklung sowie der Wundheilung Proliferation, Migration und Überleben von Endothelzellen. Die VEGF-Signalübertragung über VEGFR2 aktiviert die Signalwege PI3K–AKT, MAPK/ERK und PLCγ–PKC und steuert damit als Reaktion auf Hypoxie und entzündliche Signale das Aussprossen von Gefäßen, die Lumenbildung und die Barrierefunktion. Eine fehlregulierte VEGF-Aktivität steht mit aberranter Neovaskularisierung, Ödemen und chronisch-entzündlichem Remodelling in Verbindung und ist daher ein wichtiges Ziel für mechanistische Studien zu Gewebeischämie, Retinopathie-Modellen und der tumorassoziierten Gefäßbiologie. VEGF beeinflusst zudem die neurovaskuläre und renale mikrovaskuläre Homöostase und unterstützt damit die Forschung zur organspezifischen Perfusion und zum fibrotischen Fortschreiten.

VEGF Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (r) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen -Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

VEGF Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (r) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des -Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der -Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen VEGF-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native -Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von VEGF-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des VEGF-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem -Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.