Plasmide CRISPR d'Activation (r) VEGF: sc-437276-ACT

Le facteur de croissance de l’endothélium vasculaire (VEGF) est un régulateur central de l’angiogenèse et de la perméabilité vasculaire dans les tissus du rat, coordonnant la prolifération, la migration et la survie des cellules endothéliales au cours du développement et de la réparation des plaies. La signalisation du VEGF via VEGFR2 active les voies PI3K–AKT, MAPK/ERK et PLCγ–PKC, modulant le bourgeonnement vasculaire, la formation de la lumière et la fonction de barrière en réponse à l’hypoxie et aux signaux inflammatoires. Une activité du VEGF dérégulée est associée à une néovascularisation aberrante, à l’œdème et à un remodelage inflammatoire chronique, ce qui en fait une cible majeure pour des études mécanistiques de l’ischémie tissulaire, des modèles de rétinopathie et de la biologie vasculaire associée aux tumeurs. Le VEGF influence également l’homéostasie neurovasculaire et microvasculaire rénale, soutenant les recherches sur la perfusion spécifique des organes et la progression fibrotique.

VEGF Le plasmide d'activation CRISPR (r) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

VEGF Le plasmide d'activation CRISPR (r) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription , où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de VEGF. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de VEGF au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie VEGF dans les cellules tumorales présentant une expression de silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.