Plasmide CRISPR/Cas9 KO VE-cadherin-2 (h): sc-401695

Présentation

PCDH12 code la VE-cadhérine-2, une molécule d’adhérence dépendante du calcium enrichie dans les cellules endothéliales vasculaires, qui favorise des jonctions cellule–cellule stables et la formation coordonnée de la barrière. En recrutant des complexes cadhérine–caténine et en se reliant au cytosquelette d’actine, la VE-cadhérine-2 contribue à l’organisation des jonctions d’adhérence, à la polarité endothéliale et à la régulation de la perméabilité lors du remodelage angiogénique. Son activité recoupe des programmes de signalisation qui ajustent la dynamique jonctionnelle, notamment des voies influençant la tension du cytosquelette et les réponses endothéliales à des signaux inflammatoires ou mécaniques. Le dérèglement de l’adhérence endothéliale et du contrôle de la barrière est pertinent pour des phénotypes de dysfonction vasculaire et constitue un point d’entrée mécanistique pour étudier l’intégrité microvasculaire dans des modèles pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO VE-cadherin-2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PCDH12 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PCDH12, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PCDH12 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine VE-cadherin-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PCDH12 pour l'étude de la signalisation de VE-cadherin-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PCDH12 essentiels à la fonction de VE-cadherin-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PCDH12 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le VE-cadherin-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le VE-cadherin-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PCDH12. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le VE-cadherin-2 plasmide HDR (h) et le VE-cadherin-2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PCDH12 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PCDH12 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.