Plasmide Double Nickase (h) VDUP1: sc-400664-NIC

TXNIP, également connu sous le nom de VDUP1, code une protéine interagissant avec la thioredoxine qui limite la capacité cellulaire de tamponnement redox en inhibant l’activité de la thioredoxine, reliant ainsi le stress oxydant aux effets de signalisation en aval. Son expression est induite par le stress métabolique et le stress du réticulum endoplasmique, et il intègre des signaux issus de la détection du glucose, de stimuli inflammatoires et de régulateurs transcriptionnels pour moduler l’apoptose, la prolifération et le métabolisme cellulaire. TXNIP participe à des voies qui gouvernent l’homéostasie des espèces réactives de l’oxygène et peut favoriser l’activation de l’inflammasome NLRP3 dans des contextes où convergent stress oxydant et stress métabolique. Une expression dérégulée de TXNIP a été associée à des troubles cardiométaboliques, à la neuro-inflammation et à la biologie tumorale, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques de l’adaptation au stress et de la signalisation immunométabolique.

VDUP1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus TXNIP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de TXNIP. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de TXNIP. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de TXNIP.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.