VDUP1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-425098

Descripción general

Txnip codifica la proteína que interactúa con tioredoxina (VDUP1), un factor regulador del estado redox que se une a la tioredoxina y la inhibe, modulando así las respuestas celulares al estrés oxidativo y la señalización sensible al redox. En células de ratón, se ha descrito que VDUP1 influye en el metabolismo de la glucosa y los lípidos, la función mitocondrial y programas inflamatorios, con conexiones reportadas con la señalización AMPK/mTOR y la modulación de la actividad del inflamasoma NLRP3. La alteración de la expresión de Txnip se ha asociado con fenotipos de estrés metabólico y señalización inmune desregulada, lo que lo convierte en un nodo útil para estudiar cómo el control redox se integra con la detección de nutrientes y las vías de citocinas. Dado que Txnip responde a nivel transcripcional a la glucosa, al estrés del retículo endoplásmico y a señales oxidativas, se examina con frecuencia en modelos de disfunción metabólica y de lesión tisular relacionada con la inflamación.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO VDUP1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Txnip en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Txnip junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Txnip tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína VDUP1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Txnip para la investigación de la señalización de VDUP1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Txnip críticos para la función de VDUP1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Txnip para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido VDUP1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido VDUP1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Txnip. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR VDUP1 (m) y el plásmido HDR VDUP1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Txnip para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Txnip definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.