Plasmide CRISPR/Cas9 KO VDUP1 (m): sc-425098

Présentation

Txnip code la protéine interagissant avec la thioredoxine (VDUP1), un facteur de régulation redox qui se lie à la thioredoxine et l’inhibe, modulant ainsi les réponses cellulaires au stress oxydatif et la signalisation sensible à l’état rédox. Dans les cellules murines, VDUP1 influence le métabolisme du glucose et des lipides, la fonction mitochondriale et les programmes inflammatoires, avec des liens rapportés avec la signalisation AMPK/mTOR et une modulation de l’activité de l’inflammasome NLRP3. Une expression altérée de Txnip a été associée à des phénotypes de stress métabolique et à une dérégulation de la signalisation immunitaire, ce qui en fait un nœud pertinent pour étudier l’interface entre le contrôle rédox, la détection des nutriments et les voies des cytokines. Comme Txnip répond au niveau transcriptionnel au glucose, au stress du réticulum endoplasmique (RE) et aux signaux oxydatifs, il est fréquemment étudié dans des modèles de dysfonction métabolique et de lésions tissulaires liées à l’inflammation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO VDUP1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Txnip dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Txnip, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Txnip à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine VDUP1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Txnip pour l'étude de la signalisation de VDUP1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Txnip essentiels à la fonction de VDUP1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Txnip pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le VDUP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le VDUP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Txnip. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le VDUP1 plasmide HDR (m) et le VDUP1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Txnip pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Txnip définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.