VDUP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400664

Übersicht

Das Thioredoxin-interagierende Protein (TXNIP), auch bekannt als VDUP1, ist ein redoxsensitiver Regulator, der an Thioredoxin bindet, um zelluläre Antworten auf oxidativen Stress und die Redoxhomöostase zu modulieren. TXNIP verknüpft Nährstoff- und Stresssignale mit der metabolischen Kontrolle, indem es die Glukoseaufnahme, die mitochondriale Funktion und entzündliche Outputs beeinflusst, und ist an Signalwegen wie der AMPK-Signalgebung, der Verarbeitung reaktiver Sauerstoffspezies (ROS) und NLRP3-Inflammasom-assoziierten Prozessen beteiligt. Eine veränderte TXNIP/VDUP1-Expression wurde mit metabolischer Dysregulation, endothelialer Dysfunktion und entzündlichen Zuständen in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext diabetesbedingter Komplikationen, der kardiovaskulären Biologie und des Krebszellstoffwechsels untersucht. Als stressinduzierbares Gen wird TXNIP zudem als Readout und als Treiber transkriptioneller Programme genutzt, die nachgeschaltet auf ER-Stress und oxidative Signalgebung folgen.

Das VDUP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TXNIP-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TXNIP-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TXNIP nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die VDUP1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TXNIP-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der VDUP1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TXNIP-Exone abzielen, die für die VDUP1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TXNIP-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom VDUP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom VDUP1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TXNIP-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das VDUP1 HDR-Plasmid (h) und VDUP1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TXNIP-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TXNIP-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.