Plasmide Double Nickase (h) VCAM-1: sc-400135-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) VCAM-1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide VCAM-1 Double Nickase (h) et le plasmide VCAM-1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant VCAM1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: VCAM-1 Antibody (E-10): sc-13160
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) VCAM-1 | sc-400135-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) VCAM-1 | sc-400135-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
VCAM1 code la molécule d’adhérence vasculaire 1 (VCAM‑1/CD106), un récepteur d’adhérence inductible de la superfamille des immunoglobulines, exprimé principalement à la surface des cellules endothéliales activées. VCAM‑1 se lie à des intégrines telles que VLA‑4 (α4β1) et α4β7 présentes sur les leucocytes afin de permettre une adhérence ferme et la migration transendothéliale, en reliant la signalisation des cytokines inflammatoires (p. ex., TNF‑α et IL‑1) aux programmes de recrutement vasculaire. Cet axe recoupe les réponses transcriptionnelles dépendantes de NF‑κB et contribue à l’activation endothéliale, au trafic leucocytaire et à l’inflammation tissulaire. Une expression dérégulée de VCAM‑1 est associée à des états inflammatoires chroniques et à des pathologies vasculaires, et elle est largement utilisée comme lecture fonctionnelle dans les études des interactions entre cellules immunitaires et endothélium.
VCAM-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus VCAM1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de VCAM1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de VCAM1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de VCAM1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.