Plasmide CRISPR d'Activation (m) VCAM-1: sc-423659-ACT

Vcam1 code la molécule d’adhérence des cellules vasculaires 1 (VCAM-1), un récepteur d’adhérence inductible de la superfamille des immunoglobulines, exprimé à la surface des cellules endothéliales activées ainsi que dans d’autres compartiments stromaux. VCAM-1 se lie aux intégrines des leucocytes, telles que VLA-4 (α4β1), pour favoriser une adhérence ferme et la migration transendothéliale lors de l’inflammation, en intégrant des signaux induits par les cytokines, notamment les voies TNF/NF-κB et celles répondant à l’IL-1. Cet axe d’adhérence module le trafic des cellules immunitaires, la perméabilité vasculaire et le remodelage tissulaire, avec une pertinence large pour les phénotypes inflammatoires, la pathologie vasculaire et les interactions tumeur–stroma. La VCAM-1 murine est donc largement utilisée pour étudier l’activation endothéliale, le recrutement leucocytaire et le dialogue avec le microenvironnement in vivo et dans des modèles de cellules primaires.

VCAM-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Vcam1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

VCAM-1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Vcam1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Vcam1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de VCAM-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Vcam1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de VCAM-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie VCAM-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Vcam1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.