Plasmide CRISPR d'Activation (h) VCAM-1: sc-400135-ACT

VCAM1 code pour la molécule d’adhérence cellulaire vasculaire 1 (VCAM‑1), un récepteur d’adhérence inductible de la superfamille des immunoglobulines, exprimé à la surface de l’endothélium activé, qui médie l’adhésion ferme des leucocytes et leur migration transendothéliale via la liaison à des intégrines telles que VLA‑4 (α4β1). Son expression est fortement augmentée par les cytokines inflammatoires via les voies de signalisation NF‑κB et MAPK, reliant l’activation endothéliale au trafic des cellules immunitaires, aux modifications de la perméabilité vasculaire et à l’infiltration tissulaire. VCAM‑1 participe à des programmes d’inflammation vasculaire qui s’entrecroisent avec les réponses au stress oxydatif et les réseaux de cytokines/chimiokines. Une expression dérégulée de VCAM1 est associée aux états inflammatoires chroniques, au développement des lésions athéroscléreuses et aux interactions immunitaires tumeur–stroma, ce qui en fait un marqueur moléculaire utile de l’activation endothéliale et de la biologie du recrutement leucocytaire.

VCAM-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de VCAM1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

VCAM-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus VCAM1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription VCAM1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de VCAM-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus VCAM1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de VCAM-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie VCAM-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de VCAM1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.