Vav2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401490

Übersicht

VAV2 kodiert Vav2, einen multidomänigen Guanin-Nukleotid-Austauschfaktor (GEF), der Rho-Familien-GTPasen wie RAC1 und CDC42 nachgeschaltet von Rezeptor-Tyrosinkinasen und Integrin-Signalwegen aktiviert. Über seinen DH-PH-katalytischen Kern sowie SH2/SH3-vermittelte Interaktionen koordiniert Vav2 den Umbau des Aktin-Zytoskeletts, Membranruffling und die Dynamik fokaler Adhäsionen, die Zellmigration und -adhäsion unterstützen. Vav2-abhängige Signalübertragung überschneidet sich mit Signalwegen wie PI3K, MAPK und Netzwerken der Src-Familien-Kinasen und verknüpft extrazelluläre Signale mit transkriptionellen und zytoskelettalen Effekten. Eine Fehlregulation der VAV2-Aktivität oder -Expression wurde in mehreren krankheitsrelevanten Kontexten mit verändertem invasivem Verhalten und einer Umprogrammierung von Signalnetzwerken in Verbindung gebracht, was VAV2 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien zu Motilität und Signaltransduktion macht.

Das Vav2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des VAV2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des VAV2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von VAV2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Vav2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von VAV2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Vav2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf VAV2-Exone abzielen, die für die Vav2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere VAV2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Vav2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Vav2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des VAV2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Vav2 HDR-Plasmid (h) und Vav2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von VAV2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten VAV2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.