Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Vav Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423655
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Vav El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Vav, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Vav Anticuerpo (D-7): sc-8039
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Vav Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423655 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Vav1 codifica Vav, un factor de intercambio de nucleótidos de guanina específico de células hematopoyéticas que activa GTPasas de la familia Rho, como Rac1 y Cdc42, para coordinar la remodelación del citoesqueleto y la propagación de señales. En células inmunitarias de ratón, Vav1 integra la señalización aguas abajo de los receptores de antígeno y de los receptores Fc, conectando las vías de tirosina quinasas con MAPK, NF-κB y programas transcripcionales dependientes de calcio. Estas actividades moldean el desarrollo, la activación y la migración de las células T, e influyen en las funciones efectoras impulsadas por antígenos en los distintos linajes linfoides. La desregulación de la señalización de Vav1 se ha asociado con disfunción inmunitaria y con contextos de señalización oncogénica en modelos de enfermedades hematológicas, lo que la convierte en un nodo clave para estudios mecanísticos de las redes de señalización leucocitaria.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Vav (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Vav1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Vav1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Vav1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Vav.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Vav1 para la investigación de la señalización de Vav, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Vav1 críticos para la función de Vav
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Vav1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Vav CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Vav CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Vav1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Vav (m) y el plásmido HDR Vav (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Vav1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Vav1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.