Plasmide CRISPR/Cas9 KO vanin-1 (h): sc-406512
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- vanin-1 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique vanin-1, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: vanin-1 Antibody (3-RE8): sc-135599
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO vanin-1 (h) | sc-406512 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
VNN1 code la vanine-1, une ectoenzyme ancrée au GPI dotée d’une activité pantéthéinase, qui hydrolyse la pantéthéine pour produire de la cystéamine et du pantothénate, reliant le métabolisme de la coenzyme A au contrôle redox. En modulant l’équilibre cystéamine/cystamine et, en aval, l’homéostasie du glutathion, la vanine-1 influence les réponses cellulaires au stress oxydatif, à l’inflammation et aux lésions tissulaires. L’expression de VNN1 est marquée dans des contextes épithéliaux et liés à l’immunité, où elle peut orienter le recrutement des leucocytes et la signalisation inflammatoire associée aux barrières. Une activité VNN1/vanine-1 dérégulée a été associée à des états pathologiques inflammatoires et métaboliques, ce qui en fait un nœud utile pour l’étude des voies sensibles au stress.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO vanin-1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène VNN1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du VNN1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert VNN1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine vanin-1.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en VNN1 pour l'étude de la signalisation de vanin-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de VNN1 essentiels à la fonction de vanin-1
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de VNN1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le vanin-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le vanin-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus VNN1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le vanin-1 plasmide HDR (h) et le vanin-1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie VNN1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles VNN1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.