vanin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406512

概要

VNN1は、GPIアンカー型の細胞表面エクト酵素であるバニン-1（vanin-1）をコードしています。バニン-1はパントテイナーゼ活性を有し、パントテインを加水分解してシステアミンとパントテン酸を産生することで、補酵素A（CoA）代謝とレドックス制御を結び付けています。システアミン／シスタミンのバランス調節、およびそれに続くグルタチオン恒常性への影響を介して、バニン-1は酸化ストレス、炎症、組織障害に対する細胞応答に関与します。VNN1の発現は上皮系および免疫関連の状況で顕著であり、白血球のリクルートやバリア関連の炎症シグナル伝達を形成し得ます。VNN1／バニン-1活性の異常は炎症性疾患や代謝性疾患の状態と関連付けられており、ストレス応答性経路を研究する上で有用なノードとなります。

vanin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるVNN1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、VNN1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、VNN1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、vanin-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、vanin-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、VNN1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• vanin-1の機能に不可欠なVNN1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、VNN1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• vanin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびvanin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、VNN1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  vanin-1 HDRプラスミド（h）および vanin-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはVNN1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のVNN1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。