V-ATPase α1 Double Nickase Plasmid (h): sc-403882-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das V-ATPase α1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- V-ATPase α1 Double-Nickase-Plasmid (h) und V-ATPase α1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ATP6V1A abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: V-ATPase α1: sc-293336
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
V-ATPase α1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403882-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
V-ATPase α1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403882-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP6V1A kodiert die katalytische A‑Untereinheit der V1‑Domäne der vakuolären H+-ATPase (V‑ATPase) α1, einem zentralen Bestandteil der ATP‑getriebenen Protonenpumpe, die Endosomen, Lysosomen und sekretorische Vesikel ansäuert. Durch die Kontrolle des pH-Werts in Organellen unterstützt V‑ATPase α1 die rezeptorvermittelte Endozytose, den autophagischen Fluss, den lysosomalen Abbau, den vesikulären Transport sowie die Kopplung an die Nährstoffsensorik von mTORC1 an der Lysosomenoberfläche. Eine korrekte V‑ATPase‑Aktivität ist außerdem für die Golgi- und endosomale Verarbeitung von Proteinen und Lipiden erforderlich und beeinflusst dadurch Antigenpräsentation und den Abbau von Signalen. Eine gestörte, V‑ATPase‑abhängige Ansäuerung wurde mit Neurodegeneration, metabolischer Anpassung und Invasion von Tumorzellen sowie Defekten der Proteostase und synaptischen Funktion in Verbindung gebracht, was ATP6V1A zu einem nützlichen Ziel für mechanistisch ausgerichtete, pathway‑fokussierte Studien macht.
V-ATPase α1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ATP6V1A-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ATP6V1A abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ATP6V1A-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ATP6V1A-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.