Plasmide CRISPR/Cas9 KO V-ATPase A1 (h): sc-400975

Présentation

ATP6V0A1 code l’isoforme a1 de la sous-unité « a » du domaine V0 de la H\+-ATPase vacuolaire (V-ATPase), une pompe à protons multisuunités qui acidifie les endosomes, les lysosomes et les vésicules sécrétoires. En établissant des gradients de pH luminal, la V-ATPase A1 soutient l’endocytose médiée par les récepteurs, la protéolyse lysosomale, le flux autophagie–lysosome et le trafic vésiculaire, et contribue à l’homéostasie ionique ainsi qu’à la maturation des organites. La perturbation de l’acidification dépendante de la V-ATPase est associée à des défauts de renouvellement des protéines et de transport membranaire, avec des répercussions en aval sur les réponses cellulaires au stress ainsi que sur des phénotypes liés à la neurodégénérescence et au cancer. En tant que régulateur central de l’acidification des organites, la V-ATPase A1 est fréquemment étudiée dans les voies qui gouvernent la détection des nutriments, la signalisation mTORC1 au niveau des lysosomes et la dynamique endolysosomale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO V-ATPase A1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ATP6V0A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ATP6V0A1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ATP6V0A1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine V-ATPase A1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ATP6V0A1 pour l'étude de la signalisation de V-ATPase A1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ATP6V0A1 essentiels à la fonction de V-ATPase A1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ATP6V0A1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le V-ATPase A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le V-ATPase A1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ATP6V0A1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le V-ATPase A1 plasmide HDR (h) et le V-ATPase A1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ATP6V0A1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ATP6V0A1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.