Plasmide CRISPR d'Activation (h) UTY: sc-416327-ACT

UTY (ubiquitously transcribed tetratricopeptide repeat gene, lié au chromosome Y) code une protéine nucléaire associée à la chromatine de la famille KDM6, impliquée dans le contrôle épigénétique des programmes transcriptionnels. Bien que son activité catalytique de déméthylase soit réduite par rapport à celle de ses paralogues, UTY est impliquée dans la régulation des états de méthylation de l’histone H3K27, le remodelage de la chromatine et les réseaux d’expression génique du développement. Les processus chromatinien dépendants d’UTY interfèrent avec la spécification des lignages, la différenciation des cellules immunitaires et le maintien des états transcriptionnels dans les cellules en prolifération. Les altérations de la dose d’UTY ou de la régulation liée au chromosome Y ont été étudiées dans le contexte de phénotypes moléculaires biaisés selon le sexe et de dérégulations transcriptionnelles pertinentes pour les maladies, notamment des modifications épigénomiques associées au cancer.

UTY Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de UTY sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

UTY Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus UTY dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription UTY, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de UTY. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus UTY natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de UTY au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie UTY dans les cellules tumorales présentant une expression de UTY silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.