Plasmide CRISPR d'Activation (h) UTX: sc-402761-ACT

KDM6A humain code UTX, une déméthylase des histones contenant un domaine Jumonji C (JmjC) qui catalyse l’élimination de H3K27me3, s’opposant ainsi à la répression médiée par Polycomb afin de favoriser la compétence transcriptionnelle. UTX agit au sein de réseaux de remodelage de la chromatine, notamment via un couplage fonctionnel avec la méthylation de H3K4 associée à COMPASS/MLL et la régulation de programmes géniques spécifiant la lignée. Par ces activités, KDM6A influence le contrôle du cycle cellulaire, la différenciation et le maintien de l’état épigénétique dans de multiples types cellulaires. Les altérations de la fonction de KDM6A/UTX sont fréquemment étudiées dans le contexte de paysages épigénétiques dérégulés observés en oncologie et dans les troubles du développement.

UTX Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KDM6A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

UTX Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KDM6A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KDM6A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de UTX. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KDM6A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de UTX au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie UTX dans les cellules tumorales présentant une expression de KDM6A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.