Plasmide CRISPR d'Activation (m) USP34: sc-421760-ACT

Le gène murin **Usp34** code **USP34**, une protéase spécifique de l’ubiquitine qui enlève les chaînes d’ubiquitine des protéines cibles afin de réguler leur stabilité et l’intensité des signaux qu’elles transmettent. USP34 a été associée au contrôle de la voie **Wnt/β-caténine** via la déubiquitination de composants clés de cette voie, influençant ainsi des programmes transcriptionnels qui gouvernent la prolifération, la différenciation et l’homéostasie tissulaire. En modulant la protéostasie dépendante de l’ubiquitine, USP34 affecte également les réponses aux dommages de l’ADN et des réseaux de signalisation adaptatifs au stress qui orientent les décisions de destinée cellulaire. Une activité d’USP34 et une signalisation Wnt dérégulées sont fréquemment étudiées en biologie du cancer et dans les phénotypes du développement, faisant de **Usp34** un nœud pertinent pour l’exploration mécanistique des voies dans des modèles murins.

USP34 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Usp34 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

USP34 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Usp34 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Usp34, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de USP34. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Usp34 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de USP34 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie USP34 dans les cellules tumorales présentant une expression de Usp34 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.