Plasmide CRISPR d'Activation (h) USP34: sc-409215-ACT

USP34 code une protéase spécifique de l’ubiquitine qui inverse l’ubiquitination des protéines afin de réguler leur stabilité et la sortie de signalisation. Elle a été associée au contrôle de l’activité de la voie WNT/β-caténine via la stabilisation, dépendante de la déubiquitination, de composants clés de cette voie, influençant ainsi des programmes transcriptionnels qui gouvernent la prolifération et les décisions de destinée cellulaire. L’activité d’USP34 interfère également avec la protéostasie et des processus liés aux dommages à l’ADN, par la modulation du renouvellement dépendant de l’ubiquitine et de la signalisation des points de contrôle. Une signalisation ubiquitine dérégulée impliquant USP34 a été associée, dans des contextes de biologie du cancer, à des altérations du contrôle de la croissance et du maintien de l’intégrité du génome, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des voies oncogéniques.

USP34 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de USP34 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

USP34 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus USP34 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription USP34, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de USP34. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus USP34 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de USP34 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie USP34 dans les cellules tumorales présentant une expression de USP34 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.