Plasmide Double Nickase (h) USP3: sc-404849-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) USP3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide USP3 Double Nickase (h) et le plasmide USP3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant USP3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: USP3 Antibody (8L8): sc-135597
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) USP3 | sc-404849-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) USP3 | sc-404849-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’USP3 humaine code une protéase spécifique de l’ubiquitine qui inverse l’ubiquitination afin de réguler la stabilité des protéines et la fidélité des voies de signalisation. USP3 est surtout connue pour désubiquitiner des substrats associés à la chromatine et coordonner des programmes de maintenance du génome, reliant la signalisation par l’ubiquitine aux réponses au stress de réplication de l’ADN et à la réparation des dommages à l’ADN. Par ces activités, USP3 influence la progression du cycle cellulaire et la dynamique de la chromatine, des processus fréquemment perturbés dans les troubles prolifératifs et la biologie tumorale. Une expression ou une fonction altérée d’USP3 a été associée à une dérégulation de l’homéostasie de l’ubiquitine et à des phénotypes d’instabilité génomique, pertinents pour des études mécanistiques en cancérologie et dans d’autres maladies impliquant une réparation défectueuse de l’ADN.
USP3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus USP3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de USP3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de USP3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de USP3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.