Plasmide Double Nickase (h) USP28: sc-407678-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) USP28 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide USP28 Double Nickase (h) et le plasmide USP28 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant USP28. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) USP28 | sc-407678-NIC | 20 µg | $410.00 |
USP28 code une protéase spécifique de l’ubiquitine qui contrebalance l’action des ligases ubiquitine en retirant les chaînes de polyubiquitine des protéines substrats, régulant ainsi leur stabilité et le signal qu’elles émettent. Dans les cellules humaines, USP28 a été associée au contrôle du renouvellement des protéines dans des voies impliquées dans la réponse aux dommages de l’ADN, les processus liés à la chromatine et la progression du cycle cellulaire, notamment via la modulation de programmes dépendants de MYC par désubiquitination de facteurs régulateurs clés. En façonnant la signalisation de l’ubiquitine, USP28 peut influencer la tolérance au stress réplicatif et la signalisation des checkpoints, ce qui la rend pertinente pour l’étude de l’intégrité génomique et de la transformation oncogénique. Des altérations de l’activité ou de l’expression de USP28 ont été observées dans de multiples contextes tumoraux, ce qui soutient son intérêt en tant que cible d’investigation mécanistique en biologie du cancer.
USP28 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus USP28 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de USP28. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de USP28. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de USP28.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.