Plasmide CRISPR/Cas9 KO USP28 (m): sc-433446

Présentation

Usp28 code pour l’ubiquitine-specific peptidase 28 (USP28), une enzyme déubiquitinante qui remodèle les chaînes d’ubiquitine afin de réguler la stabilité des protéines et leur renouvellement. USP28 participe au contrôle qualité et aux processus de signalisation dépendants de l’ubiquitine, qui influencent les réponses aux dommages de l’ADN, la progression du cycle cellulaire et les programmes transcriptionnels en contrôlant l’abondance de facteurs régulateurs clés. À travers ces activités, USP28 est étudiée dans des voies liées à la stabilité du génome, à la signalisation du stress et à la protéostasie. Une altération de la fonction d’USP28 a été associée à une prolifération dérégulée et à des contextes de signalisation oncogénique, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques en biologie du cancer et dans des modèles cellulaires apparentés.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO USP28 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Usp28 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Usp28, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Usp28 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine USP28.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Usp28 pour l'étude de la signalisation de USP28, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Usp28 essentiels à la fonction de USP28
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Usp28 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le USP28 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le USP28 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Usp28. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le USP28 plasmide HDR (m) et le USP28 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Usp28 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Usp28 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.