Plasmide Double Nickase (h) USP22: sc-403660-NIC

Le gène humain **USP22** code une protéase spécifique de l’ubiquitine qui constitue le module de déubiquitinylation du complexe coactivateur transcriptionnel **SAGA**. Dans ce contexte, elle retire l’ubiquitine de l’histone **H2B** ainsi que d’autres substrats, afin de moduler l’accessibilité de la chromatine et l’expression génique. Par ces activités, USP22 contribue à coordonner des programmes transcriptionnels liés à la progression du cycle cellulaire, aux réponses aux dommages de l’ADN et au maintien de la protéostasie. USP22 a été associée à des signatures transcriptionnelles oncogéniques et à des états de différenciation altérés dans de nombreux types tumoraux, ce qui en fait une cible fréquente pour des études mécanistiques sur la régulation épigénétique et le contrôle transcriptionnel. Son rôle à l’interface entre la signalisation par l’ubiquitine et le remodelage de la chromatine soutient également les recherches sur la manière dont la déubiquitinylation influence la stabilité du génome et les voies d’adaptation au stress.

USP22 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus USP22 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de USP22. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de USP22. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de USP22.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.