Plasmide Double Nickase (m) USP18: sc-423988-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) USP18 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide USP18 Double Nickase (m) et le plasmide USP18 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Usp18. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (m) USP18 | sc-423988-NIC | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin Usp18 code l’ubiquitine peptidase spécifique 18 (USP18), une enzyme de déconiugaison spécifique d’ISG15 qui agit aussi comme un régulateur négatif majeur de la signalisation des interférons de type I. USP18 atténue la sortie de la voie JAK–STAT en limitant la signalisation associée à IFNAR2 et contribue à façonner les programmes transcriptionnels antiviraux et inflammatoires en aval des gènes stimulés par l’interféron. En contrôlant l’ISGylation et la réactivité aux cytokines, USP18 influence l’homéostasie de l’immunité innée, l’activation des cellules myéloïdes et l’adaptation au stress cellulaire. Une activité d’USP18 dérégulée a été associée à des réponses aux interférons aberrantes, pertinentes pour l’autoinflammation, la biologie des infections et les interactions tumeur–système immunitaire, faisant d’Usp18 un locus utile pour des études mécanistiques des phénotypes induits par l’interféron dans des modèles murins.
USP18 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Usp18 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Usp18. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Usp18. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Usp18.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.