Plasmide CRISPR d'Activation (h) USP17L2: sc-417603-ACT

USP17L2 (ubiquitin specific peptidase 17 like family member 2) est une enzyme humaine de déubiquitination impliquée dans la régulation de la stabilité des protéines et de la dynamique de la signalisation, via le retrait de l’ubiquitine de substrats cibles. En tant que composantes du système ubiquitine–protéasome, les membres de la famille USP17 sont associés au contrôle de la progression du cycle cellulaire, de la signalisation des récepteurs et des kinases, ainsi qu’à la modulation des réponses immunitaires innées et inflammatoires par l’ajustement de voies dépendantes de l’ubiquitine. Une déubiquitination altérée peut remodeler les programmes associés à MAPK/ERK et à NF-κB, influençant la prolifération, les réponses au stress et les sorties transcriptionnelles. La dérégulation des réseaux de signalisation de l’ubiquitine incluant des paralogues de USP17 est fréquemment étudiée en biologie du cancer et dans les mécanismes de maladies liées à l’immunité, en tant que contributeur dépendant du contexte à une signalisation cellulaire aberrante.

USP17L2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de USP17L2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

USP17L2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus USP17L2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription USP17L2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de USP17L2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus USP17L2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de USP17L2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie USP17L2 dans les cellules tumorales présentant une expression de USP17L2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.