USP15 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402416-ACT

USP15 codifica uma protease específica de ubiquitina que remove cadeias de ubiquitina de proteínas-alvo para regular a sua estabilidade, localização e o resultado de sinalização no âmbito do sistema ubiquitina–proteassoma. A USP15 humana tem sido implicada no ajuste da sinalização TGF-β/SMAD, de vias de imunidade inata e antivirais e de respostas ao stress, ao modular a ubiquitinação de componentes e adaptadores dessas vias. Por meio dessas funções, a USP15 contribui para o controlo da progressão do ciclo celular, das respostas a danos no DNA e de programas transcricionais ligados à diferenciação e à plasticidade celular. A atividade ou expressão desregulada de USP15 tem sido associada a contextos de sinalização oncogénica e a fenótipos relacionados com o sistema imunitário, tornando-a relevante para estudos mecanísticos de crosstalk entre vias e de proteostase.

USP15 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de USP15 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

USP15 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus USP15 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição USP15, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de USP15. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus USP15 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de USP15 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via USP15 em células tumorais com expressão de USP15 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.