Plasmide CRISPR/Cas9 KO USP14 (m): sc-425567
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- USP14 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique USP14, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: USP14 Antibody (6E6): sc-100630
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO USP14 (m) | sc-425567 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Usp14 code pour l’enzymе ubiquitine-spécifique peptidase 14 (USP14), une déubiquitinase associée au protéasome qui raccourcit les chaînes d’ubiquitine et régule le traitement des substrats au niveau du protéasome 26S. En modulant le recyclage de l’ubiquitine et le renouvellement des protéines, USP14 influence la protéostasie, les réponses au stress et les sorties de signalisation liées à la dégradation dépendante de l’ubiquitine. Dans des cellules de souris, des modifications de l’activité d’USP14 ont été associées à des perturbations du maintien neuronal et de la fonction synaptique, ce qui concorde avec l’importance d’une dynamique du protéasome équilibrée en neurobiologie. USP14 interagit également avec des voies qui gouvernent le contrôle de la qualité des protéines et l’homéostasie cellulaire, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques des dysfonctionnements du système ubiquitine–protéasome.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO USP14 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Usp14 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Usp14, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Usp14 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine USP14.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Usp14 pour l'étude de la signalisation de USP14, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Usp14 essentiels à la fonction de USP14
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Usp14 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le USP14 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le USP14 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Usp14. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le USP14 plasmide HDR (m) et le USP14 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Usp14 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Usp14 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.