Plasmide Double Nickase (m) USP10: sc-423592-NIC

Le gène murin Usp10 code l’« ubiquitin-specific peptidase 10 » (USP10), une enzyme désubiquitinante qui inverse le renouvellement des protéines médié par l’ubiquitine afin de moduler la durée des signaux et de maintenir la protéostasie. USP10 participe à la régulation des réseaux de réponse au stress et des programmes de destinée cellulaire en modulant la stabilité et le trafic de protéines de signalisation clés, influençant des processus tels que les réponses aux dommages de l’ADN, le renouvellement lié à l’autophagie et la signalisation inflammatoire. Par son contrôle, dépendant de la désubiquitination, de l’abondance des protéines, USP10 peut affecter le contrôle des points de contrôle du cycle cellulaire, la susceptibilité à l’apoptose et l’adaptation métabolique. Une activité d’USP10 dérégulée a été associée à des phénotypes pathologiques en oncologie et dans des contextes liés à l’immunité, faisant d’Usp10 un nœud utile pour des études mécanistiques de la biologie des voies de l’ubiquitine chez les mammifères.

USP10 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Usp10 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Usp10. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Usp10. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Usp10.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.