Plasmide CRISPR/Cas9 KO Usherin (m): sc-423630

Présentation

Ush2a code l’usherine, une grande protéine transmembranaire associée à la matrice extracellulaire, enrichie au niveau du complexe membranaire périciliaire des épithéliums sensoriels, où elle soutient l’architecture mécanossensorielle et l’intégrité cellulaire à long terme. Chez la souris, l’usherine contribue à l’organisation des stéréocils et au maintien des photorécepteurs en coordonnant des complexes protéiques impliqués dans l’adhésion cellulaire, le transport ciliaire et le couplage au cytosquelette. L’altération de USH2A est fortement associée au syndrome d’Usher de type II et à la rétinite pigmentaire, reliant ce gène à des voies qui régissent la signalisation dépendante des cils et l’homéostasie des neurones sensoriels. En conséquence, des modèles de perte de fonction de Ush2a sont utilisés pour explorer le transport ciliaire, l’assemblage de l’échafaudage extracellulaire et les réponses au stress liées à la dégénérescence dans des contextes rétiniens et de l’oreille interne.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Usherin (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Ush2a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Ush2a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Ush2a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Usherin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Ush2a pour l'étude de la signalisation de Usherin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Ush2a essentiels à la fonction de Usherin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Ush2a pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Usherin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Usherin plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Ush2a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Usherin plasmide HDR (m) et le Usherin (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Ush2a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Ush2a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.